专利号:W02021030617-A2A3

乳寡糖 (human milk oligosaccharideHMO) 是母乳中仅次于乳糖和脂质的第三大成分。迄今为止,已在人乳中鉴定出 200 多种不同种类的 HMO。越来越多的证据表明这些HMO对健康有益,包括促进保护性肠道微生物如双歧杆菌的生长、增加对胃肠道感染的保护、增强免疫系统和改善认知发展。由于在其他奶源(例如牛或山羊)中未发现 HMO,因此传统上 HMO 的唯一来源是母乳。现阶段,研究人员正努力提高婴儿配方奶粉的营养价值并扩大 HMO 在儿童和成人营养方面的使用。

Amyris公司专利W02021030617-A2A3公开了能够产生一种或多种人乳寡糖(HMO)的经遗传修饰的酵母细胞以及制备此类细胞的方法。酵母细胞被改造为包含编码转运蛋白的异源核酸和一种或多种编码HMO生物合成途径的酶的异源核酸。还提供了发酵组合物,包括所公开的转基因酵母细胞,以及生产和回收由酵母细胞产生的HMO的相关方法。

主要权利要求:

1、一种经基因修饰以产生一种或多种人乳寡糖的酵母​​细胞,其中所述酵母细胞包含:

(i) 编码人乳寡糖 (HMO) ABC 转运蛋白多肽的异源核酸;

(ii)一种或多种异源核酸,它们各自独立地编码至少一种人乳寡糖生物合成途径的酶。

2、人乳寡糖 (HMO) ABC 转运蛋白包括:2'-岩藻糖基乳糖ABC转运蛋白,其序列与EQ ID NO1-27中任一项氨基酸序列相似度达95%以上;乳-N-新四糖ABC转运蛋白,其序列与EQ ID NO28-98中任一项氨基酸序列相似度达95%以上;6'-唾液乳糖ABC转运蛋白,其序列与EQ ID NO99-126中任一项氨基酸序列相似度达95%以上。

3、一种或多种人乳寡糖包括2'-岩藻糖基乳糖、3'-岩藻糖基乳糖、乳-N-四糖、乳-N-新四糖、3'-唾液乳糖、6'-唾液乳糖和二岩藻糖基乳糖。

4、所述酵母细胞包括:

(i) 酿酒酵母细胞,所述一种或多种异源核酸编码的酶包括乳糖转运蛋白或乳糖渗透酶;

(ii)马克斯克鲁维酵母细胞,包含编码β-半乳糖苷酶核酸至少一部分的缺失。

5、一种生产一种或多种人乳寡糖的方法,该方法包括在培养基中于适合酵母细胞产一种或多种人乳寡糖的条件下,培养权利要求1-46中任意一项经遗传修饰的酵母细胞群。其中培养基包含蔗糖和乳糖,任选地其中蔗糖与乳糖的质量比小于40

6、一种发酵组合物,包括:包含上述权利要求中任一项的酵母细胞的基因修饰酵母细胞群;以及包含由酵母细胞产生的一种或多种人乳寡糖的培养基。

7、一种从权利要求的发酵组合物中回收一种或多种人乳寡糖的方法,该方法包括:从培养基中分离至少一部分转基因酵母细胞群;将分离的酵母细胞与加热的含水洗涤液接触;从分离的酵母细胞中除去洗涤液。

8、一种基因修饰酵母细胞以产生一种或多种人乳寡糖的方法,该方法包括:

(a) (i) 将编码 ABC 转运蛋白多肽的异源核酸引入酵母细胞;(ii) 将各自独立编码人乳寡糖生物合成途径的至少一种酶的异源核酸引入酵母细胞;

(b)将编码ABC转运蛋白多肽的异源核酸引入酵母细胞,其中酵母细胞包含一种或多种异源核酸,所述异源核酸各自独立地编码人乳寡糖生物合成途径的至少一种酶。

(冷静 摘译)


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