合成生物催化剂,摘译自:

专利US2020339972-A1US2020339973-A1

青霉素G酰化酶(penicillin G acylasePGA),EC3.5.1.11,催化青霉素G侧链的酰胺键断裂,它可以用于6-氨基青霉烷酸和苯乙酸的生产,其中6-氨基青霉烷酸是工业半合成内酰胺类抗生素如阿莫西林、阿尼西林和头孢氨苄的关键化合物。游离的天然PGA在商业应用过程中表现出不稳定性,需要固定化使用,目前PGA已被报道共价结合到多种载体上。但是,附着在固体表面会导致酶活力和/或选择性降低,以及溶质进入受限,此外,虽然固定化PGA可以重复使用,但是酶的稳定性差限制了这一应用。PGA催化青霉素G6-氨基青霉烷酸的过程是立体选择性的。6-氨基青霉烷酸的生产是药物生产中最大的应用。PGA的活力与苯乙酰基部分相关,可以立体专一地水解伯胺和醇的各种苯乙酰衍生物。

20201029日,Codexis公司专利(US 2020/0339972-A1US2020339973-A1)公开了具有高活性和高稳定性的青霉素G酰化酶变体,用于药物生产。这两个专利提供了工程化PGA的核苷酸序列、包含该固定化酶的组合物以及使用工程化表达PGA的方法。工程化的PGA能够在游离胰岛素的A1B1B29位添加保护基团或从胰岛素A1/B1/B29三保护中去保护基团来生产苯乙酸酯单保护或多保护的胰岛素。

主要权利要求为:

1.      一种编码工程化青霉素G酰化酶的核苷酸,其多肽序列与SEQ ID NO: 1220至少95%相同,所述青霉素G酰化酶在X2位置包含亮氨酸残基;

2.      权利要求1中编码该基因的核苷酸,其所述青霉素酰化酶能够产生苯乙酸酯单保护或双保护的胰岛素;

3.      一个包含权利要求1中核苷酸序列的载体;

4.      包含权利要求3中载体的宿主细胞。

5.      生产酰化胰岛素,包括提供工程化青霉素G酰化酶和胰岛素,将工程化青霉素G酰化酶和胰岛素在一定条件下暴露,使得工程化青霉素G酰化酶丙烯酸酯化胰岛素。

 

(徐佳琪 摘译)

 


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