合成生物催化剂，摘译自：

http://apps.webofknowledge.com/full_record.do?product=DIIDW&search_mode=GeneralSearch&qid=1&SID=5B8VyxYFhMca7c456Cd&page=1&doc=1&UT=DIIDW:202090715V

细胞色素P450单加氧酶（P450s）包含一大类自然界中广泛分布的血红素酶。从巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium）中获得的细胞色素P450-BM3是一种NADPH依赖型酶，催化长链脂肪酸、醇和酰胺的羟基化，以及不饱和脂肪酸的环氧化。P450-BM3的还原酶（65kDa）和单加氧酶（55kDa）结构域融合，形成120kDa的全酶。尽管细胞色素P450酶已成为众多研究的主题，但仍需要改进的P450酶用于高活性催化广泛的底物。

2020年9月17日，Codexis公开发明专利US 2020/0291365 A1，提供了活性改善的P450-BM3变体。在一些实施案例中，P450-BM3变体在广泛的底物范围内表现出改善的活性。一种重组细胞色素P450-BM3变体与AEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14或16中所述的多肽序列具有至少90%的序列同源性。P450-BM3变体表现出比P450单加氧酶更高的活性是因为融合的还原酶和血红素结构域之间有效的电子转移。在一些实施案例中，本发明的重组细胞色素P450-BM3变体能够氧化至少3种有机物。在进一步的实施案例中，本发明的重组细胞色素P450-BM3变体能够氧化至少一种选自氯雷他定、伊马替尼、吉非替尼和双氯酚酸的有机底物。

本发明还提供了包含至少一种核苷酸序列的表达载体。在一些另外的实施方案中，载体包含至少一个多核苷酸序列，该序列与一个合适的调控序列连接，在合适的宿主细胞中表达。在一些实施方案种，宿主细胞是原核或真核细胞。在一些另外的实施方案中，宿主细胞是原核细胞。在一些进一步的实施方案中，宿主细胞是大肠杆菌。本发明还提供了生产至少一种重组细胞色素P450-BM3变体的方法。

在一些实施方案中，本发明提供的P450-BM3变体催化下图中多种底物的转化率得到改善。

（徐佳琪 摘译）