Cas9是基因组编辑工具首选Cas效应蛋白。Cpf1这个板凳队员极少有上场表现机会。

孙兵兵等在耻垢分枝杆菌中测试了2类共14种不同密码子优化的Cas效应蛋白,其中仅Treponema denticola来源人密码子优化的Cas9TdCas9_m)、Neisseria meningitidis来源的Cas9NmCas9)和Francisella tularensis来源谷氨酸棒杆菌密码子优化的Cpf1FnCpf1_cg)不影响细胞生长。在这3Cas效应蛋白表达质粒上增加gRNA转录盒, TdCas9_mNmCas9质粒转化子数量下降约十倍,而FnCpf1_cg质粒则下降百倍。这表明FnCpf1_cg具有更强的切割活性,且仅在它的转化子中检测到了靶标序列的碱基删除,效率最高达70%。这一CRISPR-FnCpf1_cg质粒将编辑周期缩短至7N+2天,已经共享到金斯瑞MolecularCloud质粒共享平台 (https://www.molecularcloud.org/)【参考阅读:来,金斯瑞要帮全球实验室省120个亿,了解一下https://mp.weixin.qq.com/s/coIS7GUXjJzXWhVe4KFk3Q】,有望在结核分枝杆菌与新金分枝杆菌等其他分枝杆菌中推广使用。

通讯作者蒋宇博士去年利用FnCpf1解决了Cas9对谷氨酸棒杆菌的毒性问题,建立了高效的谷棒CRISPR-Cpf1基因组编辑系统(https://www.nature.com/articles/ncomms15179/)。此次她还是用FnCpf1再次战胜Cas9,实现了高效基因中断,说明Cpf1上回在谷棒的“过人”表现绝非偶然!

 

 


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