合成生物催化剂工程:https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acssynbio.3c00193?fig=agr1&ref=pdf

 CRISPR相关转座酶(CRISPR-associated transposases,CASTs)因不依赖同源重组已被用于大片段整合、多基因插入或失活以及多重正交基因组编辑。然而,CASTs尚未在革兰氏阳性菌模式菌枯草芽胞杆菌和重要的工业微生物谷氨酸棒杆菌中得到应用。

 近日,来自中国科学院合成生物学重点实验室杨思琪等在《ACS Synthetic Biology》上发表文章”RNA-Guided DNA Transposition in Corynebacterium glutamicum and Bacillus subtilis”,作者通过在枯草芽胞杆菌和谷氨酸棒杆菌中部署来源于霍乱弧菌的I−F型CAST,能检测到微弱转座,效率分别为0.00018%和0.027%。在LB培养基中将培养温度降至16℃,可使枯草芽胞杆菌插入效率提高到3.64%。通过在供体DNA中加入壮观霉素筛选标记,可在谷氨酸棒杆菌目标位点整合长达9 kb的DNA片段,效率为13.4%,超越了目前已有工具。

 CAST在这两个具有重要学术意义和工业相关的细菌中成功部署,表明它在各种细菌中具有巨大的潜力,并可以进一步优化实现MUCICAT。

(徐少元 摘译)

 


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