合成生物催化剂 摘自于:https://rnajournal.cshlp.org/content/early/2018/10/22/rna.067355.118.full.pdf+html

          Cas9核酸酶是IICRISPR系统中关键酶,天然存在多个同源蛋白,其中对化脓链球菌来源的Cas9SpCas9)的研究最多,且应用更为广泛。金黄色葡萄球菌来源的Cas9SaCas9)在2015年被发现时,便被验证不仅具备SpCas9相当的切割效率,还具有一样的靶向精确度,且SpCas9SaCas9蛋白只有17%序列同源性。因此本文作者便利用生化及酶动力学比较这两个酶的差异性。


结果显示,SpCas9sgRNA的亲和力高于SaCas9蛋白;且体外实验证明了在底物DNA足够的条件下,SaCas9为多级转化酶SpCas9是一级转化酶。之后实验表明SpCas9SaCas9发生切割后,前者较后者释放剪切后的DNA产物慢,所以可能游离出的SaCas9可以进行下一轮剪切,从而解释了SaCas9为多级转化酶。之前有研究表明SpCas9存在剪切后核酸外切酶活性,对剪切后的DNA产物进行再剪切作用,但文中发现SaCas9并不具有此活性。

综上,文中详细比较了SpCas9sgRNA酶催化动力学差异,让我们更加了解了Cas9,为我们更好的利用CRISPR-Cas9提供参考。


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