合成生物催化剂,摘译自:https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acssynbio.1c00006

 

V-A型抗CRISPR蛋白(Type V-A anti-CRISPR proteins,AcrVA)代表噬菌体对CRISPR-Cas12a原核免疫系统的反应。 CRISPR-Cas12a被重新用于高等真核生物中,以执行基因编辑和转录调控,后者通过切割活性失活的Cas12a(dCas12a)进行,并采用AcrVAs来调节dCas12a活性。但是,尚未探索在酿酒酵母中使用基于dCas12a的转录因子和AcrVAs。

近日,天津大学Mario Andrea Marchisio教授在ACS Synthetic Biology上发表文章:Saccharomyces cerevisiae Synthetic Transcriptional Networks Harnessing dCas12a and Type V-A anti-CRISPR Proteins。在这项工作中,作者表明,在酿酒酵母中,两种dCas12a蛋白(denAsCas12a和dLbCas12a)既可以作为激活剂(与强激活域融合后)又可以作为阻遏剂,而dMbCa12a是无功能的。 dCas12a-ADs的激活效率表现出对crRNA结合位点数量的依赖性,而与细胞中crRNA的数量没有直接关系。此外,AcrVA1,AcrVA4和AcrVA5能够抑制酵母中的dLbCa12a,而denAsCas12a仅被AcrVA1抑制。但是,AcrVA1仅在高浓度下表现良好。共表达两个或三个AcrVA不会增强对dCas12a(-AD)的抑制作用,表明不同AcrVA之间存在竞争。此外,AcrVA4大大限制了LbCas12a的基因编辑。 总之,作者的研究结果表明,dCas12a:crRNA和AcrVA蛋白是酿酒酵母合成转录网络中高效的成分。

 

(张介泽 摘译)

 


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